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標(biāo)記 !!光敏生物素（"#$%$&’$%’(）是一種光敏化合物，通過一個(gè)連接臂，一端連接生物素，另一端連接化學(xué)性質(zhì)活潑的光敏基團(tuán)。在強(qiáng)可見光下，光敏基團(tuán)與核苷酸特定部位共價(jià)結(jié)合，合成光敏生物素標(biāo)記探針。 !!（三）地高辛標(biāo)記物 !!地高辛（)’*$+’*,(’(，-’*）是類固醇半抗原化合物，通過一個(gè) ..個(gè)碳原子的交聯(lián)臂與尿嘧啶核苷酸的嘧啶環(huán)上的第 /位碳相連，形成地高辛標(biāo)記的尿嘧啶核苷酸。地高辛標(biāo)記的效率高，一般每 01 20/個(gè)核苷酸（(%）中就帶噴霧干燥機(jī)一個(gè)地高辛配基，雜交后又有靈敏的免疫酶學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)，靈敏度高，有取代生物素標(biāo)記探針的趨勢(shì)。 !!（四）分子信標(biāo) !!分子信標(biāo)（3$4,56478 &,75$(）是根據(jù)核酸堿基配對(duì)原則和熒光共振能量轉(zhuǎn)移現(xiàn)象設(shè)計(jì)的。分子信標(biāo)長(zhǎng)約 0/ (%，空間結(jié)構(gòu)呈莖環(huán)形，其中環(huán)序列是和靶核酸互補(bǔ)的探針，莖長(zhǎng) / 29 (%，由與靶序列無關(guān)的互補(bǔ)序列構(gòu)成，莖的一端連上一個(gè)熒光分子，另一端連上一個(gè)淬滅分子（ :6,(5#,8）。當(dāng)無靶序列時(shí)，分子信標(biāo)呈莖環(huán)結(jié)構(gòu)，熒光分子和淬滅分子非常接近，熒光分子發(fā)出的熒光被淬滅分子吸收并以熱的形式散發(fā)，檢測(cè)不到熒光信號(hào)。當(dāng)有靶序列存在時(shí)，分子信標(biāo)的環(huán)序列和靶序列特異的結(jié)合，形成的雙鏈比莖環(huán)結(jié)構(gòu)更穩(wěn)定，熒光分子和淬滅分子分開，熒光分子發(fā)出的熒光不被淬滅分子吸收，則可檢測(cè)到熒光。二、分子雜交的方法 !!分子雜交分為固相雜交、液相雜交和固相液相雜交。
固相液相雜交是把欲檢測(cè)的核酸樣本或探針先結(jié)合到固相載體上，再與液體中的探針或核酸樣品進(jìn)行雜交反應(yīng)，漂洗去除未反應(yīng)的探針或核酸樣品，經(jīng)檢測(cè)雜交信號(hào)，判斷雜交結(jié)果。 !!（一）斑點(diǎn)雜交 !!斑點(diǎn)雜交（)$% &4$% #;&8’)’<7%’$(）是將>?或 ->?變性后直接點(diǎn)樣在硝酸纖維素膜上，探針放在雜交液內(nèi)進(jìn)行雜交。方法簡(jiǎn)便、快速、靈敏，用于特定基因的定性分析。 ! ! ->?點(diǎn)陣（->? 7887;）是將相關(guān)的探針按順序點(diǎn)在硝酸纖維素膜上，待檢樣品放在雜交液內(nèi)，檢查樣品中的核酸能和哪一個(gè)探針雜交。 !!基因芯片（*,(, 5#’"@）是將探針點(diǎn)在硅片上，待測(cè)樣品放在雜交液內(nèi)進(jìn)行雜交，借助計(jì)算機(jī)判斷樣品中的核酸能和哪一個(gè)探針雜交。 ->?點(diǎn)陣和基因芯片點(diǎn)在固相上的是探針的序列，沒有進(jìn)行標(biāo)記。待測(cè)核酸樣品在雜交前進(jìn)行標(biāo)記。 !!斑點(diǎn)雜交、 ->?點(diǎn)陣、基因芯片主要是確定待檢樣品中有沒有所要的核酸。 !!（二）原位雜交 !!原位雜交
（’( @’%6 #;&8’)’<7%’$(）是用核酸探針與細(xì)胞和組織切片中的核酸進(jìn)行雜交并對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)>?分子經(jīng)限制酶切，在瓊脂糖凝膠上電泳使 ->?片段依據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量大小分開，再將電泳結(jié)果從凝膠中轉(zhuǎn)印到硝酸纖維素膜上，經(jīng)固定和變性后，在膜上與探針進(jìn)行雜交，確定電泳條帶中哪一條是所要的 ->?。開始將瓊脂糖上的 ->?條帶轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上，采用的是用吸墨汁紙吸水（&4$%%’(*）的方法（見圖 .9 9?）。英國(guó)愛丁堡大學(xué)的 B)C’( A$6%#,8(博士 第十七章 /基因技術(shù)!"!建立了此方法， !"#$%&’(印跡雜交由此得名�，F(xiàn)在將 )*+轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上多采用轉(zhuǎn)移電泳的方法（見圖 ,--.）。圖 ,--/ !"#$%&’(印跡雜交 //（0）*"’$%&’(印跡雜交（ ("’$%&’( 12"$$3(4）/ *"’$%&’(印跡雜交是經(jīng)典的 5*+分析法。操作方法和 !"#$%&’(印跡雜交方法基本相似，是將 5*+經(jīng)電泳分開后轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上進(jìn)行雜交。 //（6）7&8$&’(印跡雜交（9&8$&’( 12"$$3(4）/ 7&8$&’(印跡雜交是將蛋白質(zhì)經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳分離后轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上，檢測(cè)哪一種蛋白質(zhì)能和抗體反應(yīng)，也叫免疫印跡技術(shù)。第三節(jié) /聚合酶鏈反應(yīng)
